铁皮石斛多糖的提取和纯化方法
铁皮石斛中最重要的有效成分就是石斛多糖,它的药理作用主要表现在免疫、降血糖以及防癌、抗癌、抗衰老等方面。下面中国石斛网小编向大家介绍铁皮石斛多糖的提取和纯化方法。
一、铁皮石斛多糖的提取和纯化方法
铁皮石斛全草粉末经95%乙醇和丙酮提取后,加20倍水,于90℃温度下水浴1h,残渣反复提取3次。过滤,合并滤液,减压浓缩,4倍体积的95%乙醇沉淀数次,再溶解、浓缩、透析、冻干,得石斛粗多糖。称取0.2g石斛粗多糖样品溶于20ml双蒸水中,置于40ml离心管中,按样品溶液和脱蛋白试剂体积比为4:1加Sevag试剂(异戊醇:氯仿为1:4)5ml,振荡2min,常温下3000r/min离心20min,取上清重复上述操作,直至脱蛋白完全。上清加4倍95%乙醇,收集沉淀物依次用无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤,挥去溶剂,真空干燥得粗制品,溶于热水,滤去不溶物。浓缩,干燥得石斛粗多糖。
二、铁皮石斛多糖的提取和纯化方法
称取1.0g石斛粗多糖溶于50ml水中,DEAE-纤维素柱(3.6cm×70cm)分批上样,然后依次用水、0.05mol/L、0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L和0.5mol/L的NaCl溶液洗脱,部分收集仪收集,以1.5倍洗脱液,柱温为12℃,流速为2ml/min。各洗脱峰分别收集合并,减压浓缩后水洗部分用透析袋脱盐,盐洗部分用SephadexG-10凝胶柱色谱脱盐,再次浓缩,冻干,结果获得不同组分的纯化石斛多糖。
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